人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA试剂盒使用说明

本试剂盒仅用于科学研究目的，严禁用于医学诊断。

试剂盒原理

该试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预先包被了adropin（AD）抗体的微孔板中，依次加入待测样本、标准品和HRP标记的检测抗体，经过温育和彻底洗涤后，用底物TMB进行显色反应。在过氧化物酶的催化下，TMB会转化为蓝色，接着经过酸化变为最终的黄色，其颜色深浅与样品中的adropin（AD）浓度呈正相关。最终，通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算出样本浓度。

样品收集、处理及保存

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，采集血液后，3000转离心10分钟以迅速分离血清和红细胞。

2. 血浆：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟后取上清。

3. 细胞上清液：3000转离心10分钟以去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆：将组织与适量生理盐水混合撩碎，3000转离心10分钟后取上清。

5. 保存：如未即时检测样本，请按一次性使用分装并冻存于-20℃。避免反复冻融，需在室温下彻底解冻并均匀混合样本。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头（05-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL）

3. 恒温箱（37℃）

操作注意事项

1. 试剂盒应在2-8℃保存，并在使用前室温平衡20分钟。稀释液结晶属于正常现象，应使用水浴加热使其完全溶解。

2. 未使用的板条应立即放回自封袋中并密封保存（低温干燥）。

3. S0号标准品浓度为0可视为阴性对照。按说明书操作时，样本已稀释5倍，最终结果需乘以5以获取实际浓度。

4. 实验操作需严格按照说明书指示的时间、加液量及顺序进行。

5. 所有液体组分使用前需充分摇匀。

试剂盒组成

名称
96孔配置 - 48孔配置 - 备注
微孔酶标板 - 12孔×8条 - 12孔×4条 - 无
标准品 - 03mL×6管 - 03mL×6管 - 无
样本稀释液 - 6mL - 3mL - 无
检测抗体-HRP - 10mL - 5mL - 无
20×洗涤缓冲液 - 25mL - 15mL - 稀释按说明书
底物A - 6mL - 3mL - 无
底物B - 6mL - 3mL - 无
终止液 - 6mL - 3mL - 无
封板膜 - 2张 - 2张 - 无
说明书 - 1份 - 1份 - 无
自封袋 - 1个 - 1个 - 无

试剂的准备

20×洗涤缓冲液需以蒸馏水稀释为1：20，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩净，再用吸水纸拍干，重复洗板5次。

2. 自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1分钟，洗板5次。

操作步骤

1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余部分用自封袋密封置于4℃保存。

2. 设定标准品孔和样本孔，标准品孔中各加入不同浓度的标准品50μL。

3. 在样本孔中先加入待测样本10μL，后加样本稀释液40μL；空白孔不加任何液体。

4. 除空白孔外，在标准品孔和样本孔中加入HRP标记的检测抗体100μL，用封板膜覆盖，置于37℃水浴或恒温箱中温育60分钟。

5. 弃去反应液，逐孔加满洗涤液，静置1分钟甩去洗涤液，并用吸水纸拍干，重复洗板5次（可通过洗板机完成）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，置于37℃避光环境中孵育15分钟。

7. 每孔加入终止液50μL，15分钟内在450nm波长下测定各孔的OD值。

结果判断

在Excel中绘制标准曲线，以标准品浓度为横坐标，对应OH值为纵坐标，计算各样本浓度值。

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值应大于等于0.9900。

2. 灵敏度：最低检测浓度小于10pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物产生交叉反应。

4. 重复性：板内和板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：在2-8℃避光防潮保存。

6. 有效期：6个月。

免责声明

1. 本试剂盒仅供研究用途，禁止用于临床实验或人体实验，造成的后果由实验者自行承担，尊龙凯时对此不承担任何责任。

2. 实验者需严格按照说明书操作，任何违规操作的后果由实验者自负。